墙面:主体结构建议使用彩钢板围护,墙面光洁、不产尘积尘、耐腐蚀,易清洁、无缝隙;
地面:建议使用PVC卷材,、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏;
阴阳角:均采用圆弧角密封处理,不易积尘;
传递窗:必须设置互锁(机械或电子);
主入口:实验室主入口设有门禁管理;
通风系统:避免交叉污染;
排风系统:宜设置过滤器净化;
气流组织:采用上送下排形式;
压力梯度:压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制;
排水系统:排水系统应不渗漏,下水应有防回流设计。
应急用电:应有紧急发电设备或双回路供电。关键设备应配备足够的UPS并接入设备。
防护设施:设置洗眼装置,必要时应有应急喷淋装置;设置非接触式操作理念(感应式水、感应式自动门、互锁传递窗等)。
临床基因扩增检验实验室需要依据《机构临床基因扩增检验实验室管理办法》、《实验室生物安全通用要求》、《生物安全实验室建筑技术规范》等相关规定进行规划建设。
1、二级生物安全实验室的装修
根据《人间的病原微生物名录》,PCR实验室所操作致病性生物因子大多属于第二类病原微生物,实验活动所需生物安全实验室级别的生物危害等级为BSL-2。列举装修要点如下:
1、实验室墙壁、顶板和地板应当光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑,不得在实验室内铺设地毯和悬挂窗帘。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好、所有阴角采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;墙体和吊顶建议使用彩钢板。
2、地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
3、灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。实验室应设应急照明装置,同时考虑合适的安装位置,以保证人员安全离开实验室。
4、有可靠的电力供应和应急照明。每个房间必须装有紫外线杀菌灯,杀菌灯的安装高度在1.8~2.1m之间。
5、传递窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
6、应配备足够的固定电源插座,避免多台设备使用共同的电源插座。应有可靠的接地系统,应在关键节点安装漏电保护装置或监测报警装置。
7、实验室台(桌)柜和座椅等应稳固和坚固,边角应圆滑。实验台面应防水,并能耐受热、、酸碱、消毒剂及其他化学剂。一般采用环氧树脂台面。
8、实验台中的橱柜和实验台应牢固,实验台、柜和其他设备之间应保持一定距离,以便清洁。
9、实验室门为净化门,应有可视窗并带自动闭门器,实验室的门与门不能相对开启,必须错位开启。并达到适当的防火等级,门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生。
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3.避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4.操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的度;
5.加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6.操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器受产物气溶胶或标本DNA的污染,使用可替换或高压处理的加样器。
如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8.重复实验,验证结果,慎下结论。